Определение грамположительных и грамотрицательных бактерий

Безопасные микроорганизмы для школы

Йогурт/кисломолочные продукты

• Содержат Lactobacillus (грамположительные палочки).
• Можно приготовить мазок и окрасить.

Хлебная плесень / дрожжи (Saccharomyces cerevisiae)

• Дрожжи — эукариоты, но на Gram stain можно показать контраст.

Пробиотические бактерии из капсул

• Обычно грамположительные, безопасные. Продаются в аптеке или магазине здорового питания.

Кисломолочные продукты с живыми культурами

• Streptococcus thermophilus — кокки, грамположительные.

Бактерии с поверхности овощей/фруктов

• Например, с кожицы огурца, яблока. На них можно показать грамотрицательные бактерии (обычно палочки).

Почва (необработанная)

• Содержит разнообразные бактерии, включая безопасные грамположительные и грамотрицательные.
• Используется для демонстрации разнообразия форм и окрашивания.

Пробиотические закваски / кефирные грибки

• Безопасные культуры для наблюдения под микроскопом.

Шаг 1. Приготовление мазка

• На стерильное предметное стекло капните каплю дистиллированной воды.
• Асептически (стерильно) нанесите небольшое количество бактерий (или воспользуйтесь учебным препаратом).
• Равномерно нанесите мазок, не делайте слой слишком толстым.
• Дайте мазку высохнуть, затем закрепите (обычно легким нагревом или по инструкции).

Шаг 2. Окрашивание

• Нанесите кристаллический фиолетовый на мазок, выдержите 1 минуту, затем промойте водой.
• Нанесите йод Люголя, выдержите 1 минуту, промойте водой.
• Обесцветьте спиртом (или 95% этанол) примерно 20 секунд — не передерживайте. Промойте водой.
• Контрастно окрасьте сафранином 1 минуту.
• Промойте, промокните фильтровальной бумагой, дайте высохнуть.

Шаг 3. Наблюдение под микроскопом

Поместите препарат под микроскоп, сначала используйте малое увеличение, затем переключитесь на высокий (иммерсия или 100× + окуляр).

Определите: какие клетки окрашены фиолетовым (грамположительные), какие — розовым/красным (грамотрицательные).

Сделайте рисунок (или снимок) поля зрения, подпишите формы бактерий, окраску.

Регистрация результатов

№	Этап окрашивания	Цвет клеток	Тип бактерий	Наблюдение
1	Кристаллический фиолетовый
2	Йод (раствор Люголя)
3	Обесцвечивание спиртом
4	Сафранин

Анализ и вывод

Свяжите полученные результаты с тем, как устроена клеточная стенка бактерий (толстый слой пептидогликана у грамположительных и тонкий с внешней мембраной у грамотрицательных).

Ответьте на вопросы: удалось ли четко различить группы? Какие могли быть ошибки?

Вопросы для отчета

• Какой тип окраски у грамположительных и грамотрицательных бактерий?
• Чем можно объяснить, что грамположительные остаются фиолетовыми, а грамотрицательные — нет?
• Какие ошибки могли повлиять на результаты (например, слишком толстый мазок, передержка спирта)?
• Как можно улучшить качество окраски в следующий раз?